肺炎球菌感染を正確に診断することは、病変または血液からの病原体の排泄後にしか起こらない。検査のために、喀痰は、孤立性肺炎、敗血症疑いのための血液、他の病気における炎症性滲出液または炎症性滲出液について採取される。病理学的材料を顕微鏡検査する。カプセルで囲まれたグラム陽性の二枚貝の鱗片状形態の検出は、肺炎球菌感染の予備診断の基礎である。単離された二倍体の肺炎球菌への帰属を確立するためには、肺炎球菌のすべての血清型に対して高力価の抗体を含む複合型特異的血清を使用する。肺炎球菌髄膜炎の最初の日に、原因物質は脳脊髄液中に見出され、脳脊髄液は外部および細胞内の両方に位置する。
純粋な培養物を単離するために、試験物質を血液、血清または腹水寒天に播種する。栄養培地では、肺炎球菌は小さくて透明なコロニーを生じる。生物学的サンプルは、純粋な培養物を単離するために使用することができる。この目的のために、白色マウスを試験材料で腹腔内に感染させる。病原性肺炎球菌がマウス材料中に存在する場合、それらは24〜48時間後に死亡する。肺炎球菌抗原の検出のために、固相免疫電気泳動およびPCRの方法を用いることができる。