ヘルペスの診断は、感受性細胞培養による古典的なウイルス分離、免疫蛍光法および血清学的方法、膣鏡検査、ならびにHHV-6型およびHHV-7型を含むヘルペスウイルスの全グループを診断できる最新の分子生物学的方法(PCR、ドットハイブリダイゼーション)の使用に基づいています。
ヘルペス感染症の臨床診断方法
HSVを分離したり、ウイルス粒子やその成分を検出したりすることを目的とした主な方法 |
人体の体液中のHSVに対する抗体を検出することを目的とした補助方法 |
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性器ヘルペス(GH)は、患者の76%でHSV-2型、24%でHSV-1型によって引き起こされることが示されました。さらに、GHの単独感染は患者の22%にのみ認められ、78%の症例で微生物の関与が認められました。46%の患者で2種類の病原体による寄生虫症が検出され、そのうち40%の症例でクラミジアが検出されました。ガルドネレラ、トリコモナス、淋菌は、塗抹標本ではそれほど多くは検出されませんでした。
患者の27%では3種類の病原体による寄生虫症が、5.2%では4種類の病原体による寄生虫症が認められました。さらに、クラミジアとガードネレラ菌およびカンジダ菌の混合感染が最も多く認められました。これらのデータは、GH患者において病原体の組み合わせを特定するために徹底的な細菌学的検査を実施すること、ならびに泌尿生殖器系の混合感染の病因を詳細に研究することの必要性を裏付けており、これによりヘルペス感染症の差別化された複合治療が可能になります。
ヘルペス病変の局在に応じてHSVを分離するために研究された材料
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細胞スクレーピング |
脳脊髄液 |
気管支吸引液 |
生検 |
血 |
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1 |
2 |
3 |
4 |
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レザー |
+ |
+ |
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目 |
+ |
+ |
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性器 |
+ |
+ |
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肛門 |
+ |
+ |
+ |
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口 |
+ |
+ |
+ |
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中枢神経系 |
+ |
+ |
+ |
+ |
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肺 |
+ |
+ |
+ |
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肝臓 |
+ |
+ |
|||||||
先天性 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
サイトメガロウイルス感染症の臨床診断方法
方法 |
結果を得るのに必要な時間 |
注記 |
ウイルス学的 |
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電子顕微鏡 |
3時間 |
アクセスしにくい |
細胞培養におけるウイルス分離(VCI) |
4~20日 |
標準、 |
モノクローナル抗体を用いた早期AGの免疫蛍光染色 |
6時間 |
あまり |
細胞学的 |
2~3時間 |
あまり |
血清学的 |
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RSC |
2日間 |
標準 |
RGA |
1日 |
労働集約的 |
リーフ |
6時間 |
シンプル、 |
国立研究開発法人国立研究開発法人科学技術研究所 |
6時間 |
難しい |
リンプ |
6時間 |
難しい |
ELISA(IgM、DO) |
6時間 |
高速、シンプル |
免疫ブロット |
6時間 |
高い |
分子生物学 |
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MG |
5~7日 |
高価で |
PCR |
3時間 |
高い |
帯状疱疹ウイルスの診断方法
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実験 |
間接的 |
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選択 |
組織培養、ニワトリ胚、実験動物、許容細胞またはヘルパーウイルスとの共培養 |
分離株の同定 |
中和反応、RSC、IF、PIEF、分離株の反応沈殿、凝集、IF |
直接 |
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細胞学 |
塗抹標本:カラー免疫蛍光法 |
組織学 |
細胞の病理形態学 |
構造 |
胚顕微鏡検査、免疫電子顕微鏡検査 |
抗原の決定 |
IF、PIEF、RIM、IFA |
局所抗体産生の決定 |
Ig M、Ig G、Ig A:ELISA、RIA |
分子生物学的アプローチ |
分子ハイブリダイゼーション、PCR |
帯状疱疹ウイルスによる感染症の臨床診断
診断上の |
方法 |
期待される結果 |
急性一次感染 |
1 |
2時間で検出 |
2 |
抗体レベルはゆっくりと上昇している |
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3 |
感染後3日目に発症 |
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急性 |
1 |
2時間後のUUUの検出 |
2 |
抗体レベルはゆっくりと上昇している |
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4 |
発疹が現れてから4日後に来院 |
- 液体中のVEGF小胞の測定
- 血清学:CSC、ELISA、検出を目的とした
- 血清学:IgM の検出を目的とした ELISA。
- 血清学:IgA、IgMの検出を目的としたELISA。
帯状疱疹ウイルス感染に対する免疫反応を示す方法
アプローチ |
方法 |
2回目の血清中の抗体価の上昇の検出 |
RSK、RTGA、RPGA、IF中和反応、RIM、ELISA |
最初の血清サンプル中のIgG、IgAクラス特異的抗体の検出 |
ELISA、IF、RIM、ラテックス凝集法 |
ヘルペスウイルス感染症の患者血清の血清学的検査(ELISA)結果の解釈
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感染の平均閾値 |
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分析結果 |
解釈 |
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細胞巨大症抗CMV IgG(1-20 U/ml) 抗CMV IgM(100-300%) |
陽性 1-6 陽性 6-10 陽性 >10 |
寛解 |
単純ヘルペス1、2血清型 |
陽性 100-400 陽性 400-800 陽性 >800 |
寛解 |
この表には、ヘルペスウイルス感染症の主な臨床検査方法と、ヘルペス病変の局在を考慮して HSV を分離する際に検査される推奨生物学的材料が示されています。
感受性細胞培養への感染による単純ヘルペスウイルスおよびCMVウイルスの確実な分離。再発期の患者26名を対象としたウイルス学的検査において、感受性Vero細胞培養において23例(88.4%)でHSVが分離されました。感染培養物は、HSVに典型的な細胞変性作用、すなわち多核巨細胞の形成、または丸く肥大化した細胞の集積(クラスター形成)を示しました。症例の52.1%では、感染後16~24時間以内にウイルスの細胞変性作用の病巣が検出されました。感染培養物の培養開始から48~72時間後までに、特異的な細胞破壊を引き起こす物質の割合は87%に増加しました。また、感染後96時間以上経過後、または継代培養中に陽性結果が検出された症例はわずか13%でした。
全身性ヘルペス感染症の臨床診断方法
ヘルペスウイルス、その粒子、およびその成分を検出(分離)することを目的とした主な方法 |
生体液中のヘルペスウイルスに対する抗体の検出、血清中の酵素変化の検出を目的とした補助的方法 |
感受性細胞および動物培養におけるヘルペスウイルスの分離、 |
中和試験、 |
伝染性単核球症(EBVによる感染症)の診断には血清学的検査が用いられます。羊赤血球を用いたポール・バネル反応、単回血清検査で診断力価1:28以上、またはペア血清を用いた検査で抗体価が4倍に上昇すること。ホルマリン処理した馬赤血球の4%懸濁液を用いたホフ・バウアー反応も用いられます。結果は2分後に判定されます。伝染性単核球症において、この反応は非常に特異性が高いです。
現在、伝染性単核球症の診断法として酵素免疫測定(EIA)法が開発されています。この方法では、患者血清中のIgG抗体およびIgM抗体を、EBVに感染したリンパ芽球とインキュベートし、蛍光抗体で処理することで測定します。急性期には、ウイルスカプシド抗原に対する抗体価が1:160以上で検出されます。
輸入された市販の検査システムを用いたELISAでは、EBVエンベロープ抗体に対する抗体、EBV早期抗原に対する抗体、疾患の急性期に核と細胞質の両方で検出されるEBV早期抗原に対する総抗体、疾患の急性期に核と細胞質の両方で検出される早期EBVに対する限定抗体、疾患の最盛期に細胞質のみで検出されるEBV早期抗原に対する限定抗体、そしてEBV核抗原に対する抗体を検出できます。これらの検査システムを用いることで、EBVに関連する多くの疾患の鑑別診断が可能になります。
EBVに対する抗体が陽性であることを示すELISA検査の後、確認のための免疫ブロッティング反応が行われ、個々のEBVマーカータンパク質(pタンパク質)に対する抗体の存在が判定されます:p23、p54、p72(このタンパク質の存在はEBV増殖の可能性を示します)、p138。上記の実験室方法は、治療の有効性をモニタリングするためにも使用されます。
ウイルス学的検査の感度は85~100%、特異度は100%で、検査時間は2~5日です。HSV-1およびHSV-2に対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を用いた直接免疫蛍光法(DIF)は、実務においてよく用いられます。DIF法は、一般的な臨床検査室で容易に再現可能で、費用も安く、感度は80%以上、特異度は90~95%です。免疫蛍光顕微鏡検査では、細胞質封入体の存在、形態学的特徴、尿道、子宮頸管、子宮頸部、直腸からの塗抹標本における感染細胞の割合が明らかになりました。
PIF法は、細胞の形態学的特性とHSV抗原の局在変化に関する情報を提供します。ヘルペスウイルスによる細胞損傷の直接的な兆候(特異的な発光の検出)に加えて、PIFデータからはヘルペス感染の間接的な兆候も得られます。
- 核物質の凝集、核膜の剥離;
- 細胞核から核膜が 1 つだけ残った、いわゆる「穴」核の存在。
- 核内封入体(カウドリー小体)の存在。
PIFを実施することで、医師は感染細胞の状態について定性的だけでなく定量的評価も得ることができ、我々はこれを用いてアシクロビル(AC)を用いた抗ウイルス療法の有効性を評価しました。そこで、単純性性器ヘルペス(GH)患者80名をPIF法を用いて動態的に検査しました。アシクロビル投与前は、患者の88%で塗抹標本中の感染細胞の割合が高かった(50~75%以上)のに対し、アシクロビル1コース投与後、患者の44%で塗抹標本中に健康な細胞が検出され、31%の症例で単一の感染細胞が認められ、25%の患者で最大10%の感染細胞が認められました。
アシクロビルで治療した性器ヘルペス患者の塗抹標本中の感染細胞含有量(PIF反応)
病気の期間 |
塗抹標本中の含有率 |
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感染細胞 |
正常 |
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50~75% |
40~50% |
10% |
視野内の単一細胞 |
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再発(治療前) | 25% |
63% |
12% |
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(20) |
(50) |
(10) |
||||
寛解(治療後) | 25% |
31% |
44% |
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(20) |
(25) |
(35) |
PIF法とドットハイブリダイゼーション法を長年にわたり用いてきた結果、研究結果はほぼ100%の症例で一致することが確認されています。ヘルペスの診断の信頼性を高めるため、特に潜在性ヘルペスや軽症ヘルペスの場合、特に妊婦、産科的病歴が不良な女性、および婦人科診断が不明な患者を検査する際には、2~3種類の臨床検査法を併用することが推奨されます。
したがって、泌尿生殖器のウイルスおよび細菌感染症のPCR診断では、既往歴、疾患の特定の臨床症状の有無を考慮して、得られた陽性結果を評価する必要があります。PCRでクラミジアが検出された場合、感染の可能性が高いため、それに応じて治療上の問題を解決できます。日和見微生物であるマイコプラズマ(ウレアプラズマ)が検出された場合は、診断を確認するために追加の培養検査、つまり感受性細胞培養に患者から採取した材料を播種する必要があります。培養分析で陽性結果が得られた場合にのみ、マイコプラズマ症の診断の実験室確認について話すことができます。同じ方法で、必要に応じて、分離されたマイコプラズマのよく使用される剤形(抗生物質、フルオロキノロンなど)に対する感受性を判断することもできます。
ヘルペスウイルス科の複数のウイルスによる同時感染は起こり得ます。私たちは、1人の患者がHSV-1、HSV-2、CMVウイルスに感染しているケースをしばしば検出しました。二次性感染性疾患(腫瘍血液学的、腫瘍学的、HIV感染患者)の臨床的および臨床検査所見を有する患者は、複数のヘルペスウイルスに感染している割合が有意に高くなっていました。このように、HIV感染における臨床的および免疫学的障害の進行に伴い、分子ハイブリダイゼーション法で検出されるヘルペスウイルス数も増加することが示されています。この場合、HSV-1、CMV、HHV-6型DNAの同時検出が予後予測に最も重要であると考えられます。