A型肝炎ウイルス

ウイルス性A型肝炎は、主に肝障害を特徴とし、臨床的には中毒と黄疸として現れるヒトの感染症です。A型肝炎ウイルスは、1973年にS. Feinstoneらによって免疫電子顕微鏡法を用いて、サル（チンパンジーとマーモセット）に感染させることで発見されました。免疫電子顕微鏡法の本質は、A型肝炎患者の糞便濾液に特異的抗体（回復期血清）を加え、その沈殿物を電子顕微鏡で観察することです。ウイルスは特異的抗体と相互作用することで特異的に凝集します。この場合、ウイルスは検出しやすくなり、抗体の影響下での凝集は病原体の特異性を確認します。S. Feinstoneの発見は、ボランティアによる実験で確認されました。

A型肝炎ウイルスは球形で、ウイルス粒子の直径は27nmです。ゲノムは、分子量2.6mmの一本鎖プラスRNAで表されます。スーパーカプシドは存在しません。対称型は立方正二十面体です。カプシドは32個のカプソメアを持ち、4つのポリペプチド（VP1～VP4）によって形成されます。その特性上、A型肝炎ウイルスはピコルナウイルス科ヘパルノウイルス属に属します。抗原の観点から見ると、A型肝炎ウイルス（HAV - A型肝炎ウイルス）は均一です。HAVはチンパンジー、ヒヒ、マントヒヒ、マーモセットの体内でよく繁殖します。長い間、このウイルスは培養できませんでした。1980年代になってようやく、HAVが繁殖する細胞培養が可能になりました。当初、アカゲザル胎児腎臓の連続細胞株（培養 FRhK-4）がこれらの目的に使用されていましたが、現在はミドリザル腎臓細胞の連続細胞株（培養 4647）が使用されています。

WHO の専門家の推奨に従って、A 型肝炎ウイルス マーカーの次の命名法が採用されています: A 型肝炎ウイルス - HAV、A 型肝炎ウイルスに対する抗体: 抗 HAV IgM および抗 HAV IgG。

HAVは、直径27～30nmの小さな粒子で、正20面体対称性を有し、均質性を有しています。免疫凝集法を用いて得られた電子像では、表面に対称的に配置されたカプソメアを有する電子密度の高い粒子が観察されます。陰性造影剤を用いると、標本中にカプソメアが満たされた粒子と空になった粒子の両方が観察されます。HAVのヌクレオカプシドは、インフルエンザのヌクレオカプシドとは異なり、表面に突起や膜がありません。また、HAVウイルス粒子がハート型の構造をとらないことも重要です。

A型肝炎ウイルスは、その物理化学的特性に基づき、ピコルナウイルス科、エンテロウイルス属（シリアル番号72）に分類されています。しかし、この分類法はあまりにも特異であることが判明したため、WHOは「A型肝炎ウイルス」という用語を維持することが可能であると判断しました。

ピコルナウイルス科のすべてのウイルスと同様に、A型肝炎ウイルスはリボ核酸を含んでいます。いくつかの研究室では、A型肝炎ウイルスのゲノムをクローン化できる可能性が実証されており、ワクチン開発への可能性が開かれています。

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A型肝炎ウイルス耐性

このウイルスは、高温、酸、脂肪系溶剤（脂質を含まない）、消毒剤に対して比較的耐性があり、低温にも良好に耐えます。これらすべてが、外部環境における長期保存に寄与しています。室温では数週間生存し、60℃では4～12時間で感染力を部分的に失い、85℃では数分で完全に感染力を失います。また、塩素に対しても高い耐性があるため、浄水場のバリアを通過して水道水に侵入することができます。

すべてのデータを要約すると、A 型肝炎ウイルスの特徴は次のように表せます。

• 自然宿主は人間である。
• 実験動物 - マーモセット、チンパンジー
• 感染源は糞便です。
• この病気は流行性かつ風土病性である。
• 感染経路：糞口感染
• 潜伏期間 - 14～40日
• 慢性肝炎への移行は観察されない。

HAV の免疫学的特性は次のとおりです。

• プロトタイプ株：Ms-1、CR-326、GВG。いずれも免疫学的には類似または同一です。
• 抗体（IgM および IgG）は、ウイルスの構造タンパク質の導入に応じて生成され、保護作用を持ちます。
• I. ヒト血清ガンマグロブリンの保護効果 - 感染前または潜伏期間中に投与すると、病気を予防または軽減します。

NAU の物理化学的特性は次のとおりです。

• 形態：立方対称の殻のない球状粒子、カプシドは 32 個のカプソメアから構成される。
• 直径 - 27～30 nm;
• CsCl 中の密度 (g/cm3) - 1.38～1.46 (開いた粒子)、1.33～1.34 (成熟したウイルス粒子)、1.29～1.31 (未成熟なウイルス粒子、空の粒子)。
• 沈降係数 - 成熟ウイルス粒子156～160個
• 核酸は一本鎖の線状RNAです。
• 相対分子量 - 2.25 106-2.8 106KD;
• ヌクレオチドの数は6,500〜8,100です。

物理的および化学的影響下における HAV の安定性は次のとおりです。

• クロロホルム、エーテル - 安定;
• 塩素、0.5〜1.5 mg/l、5°C、15分 - 部分的不活性化。
• クロラミン、1 g/l、20 °C、15 分 - 完全な不活化。
• ホルマリン、1:4000、35〜37 °C、72 時間 - 完全な不活化、1:350、20 °C、60 分 - 部分的な不活化。

温度：

• 20〜70℃ - 安定;
• 56 °C、30 分 - 安定;
• 60 °C、12 時間 - 部分的な不活性化。
• 85 °C、1 分 - 完全な不活化。
• オートクレーブ処理、120 °C、20 分 - 完全な不活化。
• 乾熱、180 °C、1 時間 - 完全な不活化。
• UFO、1.1 W、1分 - 完全な不活性化。

提示されたデータは、A型肝炎ウイルスの物理化学的性質がエンテロウイルスに最も近いことを示しています。他のエンテロウイルスと同様に、A型肝炎ウイルス（HAV）は多くの消毒液に対して耐性を示し、85℃で数分以内にオートクレーブ処理することで完全に不活化されます。

A型肝炎ウイルスは、ヒトおよびサルの細胞培養において、一次培養および連続単層培養系で増殖できることが証明されています。特に、感染サルの肝臓抽出物を出発材料として用いた場合、in vitro培養においてA型肝炎ウイルスの活発な増殖が観察されます。ただし、in vitro培養におけるA型肝炎ウイルスの増殖に関するすべての実験において、一次培養中の長い潜伏期間（最長4～10週間）が考慮され、その後ウイルス遺伝物質の蓄積が増加しますが、その絶対値は極めてわずかであり、多くの研究者が組織培養におけるA型肝炎ウイルスの複製は不完全であると主張する根拠となっています。

A型肝炎ウイルスの組織外培養における増殖に関する文献データをまとめると、試験管内におけるHAVの長期生存は疑いの余地がないと言える。しかし、ウイルスの安定した高レベルの複製に最適な条件は未だ特定されておらず、これがその生物学的特性の研究、診断薬製造やワクチン設計のための試薬源の入手を妨げている。

同時に、この問題に関するより楽観的な見解も文献に見受けられます。A型肝炎ウイルスの培養に関連するすべての問題の解決は、近い将来に実現するでしょう。アカゲザル胎児腎細胞の培養におけるA型肝炎ウイルスの増殖に最適な条件を研究した結果、感染性ウイルスの産生期（5継代培養段階で最大6～8日間）とウイルス抗原の集中的な蓄積期という2つの段階が特定されました。また、ウイルス抗原の最も顕著な蓄積は、いわゆるローラー培養（回転フラスコ）の条件下で起こることも示されました。この方法は、培養抗原を大量に得るための幅広い可能性を開き、その結果、診断システムの開発やワクチン製造のための原料が生まれるでしょう。

A型肝炎の疫学

A型肝炎ウイルスはヒトに対して非常に病原性が高い。WHO（1987）によると、ウイルス粒子1個の感染で発症する。しかし、実際の感染量はおそらくこれよりはるかに高い。唯一の感染源は感染者自身である。ウイルスは、黄疸発症の12～14日前と黄疸期の3週間に、便とともに大量に排泄される。黄疸性、無黄疸性、無症候性のA型肝炎患者における病原体排泄に有意な差は認められていない。感染経路は糞口感染で、主に水系を介するほか、家庭内や食品を介することもある。感染経路は糞口感染で、主に水系を介するほか、家庭内や食品を介することもある。ウイルスの主な（一次）感染経路は水系である。空気中の飛沫による感染も考えられる。感受性は普遍的である。14歳未満の子供の多くが罹患する。この病気は秋から冬にかけて顕著な季節性があります。

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A型肝炎の症状

潜伏期間はウイルスの感染量に応じて15日から50日まで様々ですが、平均28日から30日です。体内に侵入したA型肝炎ウイルスは、所属リンパ節で増殖し、血液を透過して肝細胞に侵入し、急性びまん性肝炎を引き起こします。この症状は、肝細胞および肝臓の細網内皮細胞の損傷、ならびに解毒機能およびバリア機能の低下を伴います。肝細胞の損傷は、ウイルスの直接的な作用ではなく、免疫病理学的メカニズムの結果として生じます。A型肝炎の最も典型的な病態は、急性黄疸性周期型であり、潜伏期、前駆期（黄疸前期）、黄疸期、そして回復期を経ます。しかし、感染巣では、無黄疸性および無症候性の感染患者が多数検出され、その数は黄疸性感染患者を著しく上回っています（「氷山現象」）。

感染後の免疫は、ウイルスを中和する抗体と免疫記憶細胞によって強力かつ長期にわたり持続します。

A型肝炎の微生物学的診断

A型肝炎の診断（チンパンジー、マーモセット、ヒヒなどの動物への感染は除く。これらは我が国では入手できません）は、RSC法、免疫蛍光法、免疫接着赤血球凝集法（補体存在下でウイルス抗原と抗体の複合体が赤血球に吸着し、赤血球を接着させる）といった様々な免疫学的手法に基づいています。しかし、これらの手法は特異的なウイルス抗原がないため、その適用範囲が限られており、また、免疫蛍光法は肝生検を必要とするため、実施には適していません。免疫電子顕微鏡法は信頼性が高く特異性も高いものの、非常に手間がかかります。そのため、これまでのところ唯一許容される免疫学的手法は、特にM型免疫グロブリンの「捕捉」の改変において、IFMまたはRIMの形態で固相を免疫吸着分析する方法です。我が国では、この目的のために「DIAGN-A-HEP」という検査システムが提案されています。この検査システムの原理は以下の通りです。まず、Mクラス免疫グロブリン（抗免疫グロブリンM）に対する抗体をポリスチレン製ウェルの壁に吸着させ、検査対象の患者血清を加えます。血清中にIgM抗体が含まれている場合、IgM抗体はMクラス抗抗体と結合します。次に、細胞培養で得られた特異的ウイルス抗原（A型肝炎ウイルス）を加えます。系を洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識した抗ウイルス抗体を加えます。系の4つの成分すべてが相互作用すると、4層の「サンドイッチ」が形成されます。

• 抗免疫グロブリンM、
• 免疫グロブリンM（A型肝炎ウイルスに対するもの - 研究対象の患者の血清中）
• ウイルス抗原、
• 酵素標識抗ウイルス抗体。

この複合体を検出するには、酵素の基質をウェルに加えます。酵素の作用により基質は分解され、着色物質が生成されます。色の強度は、分光光度計または比色計を用いて定量的に測定できます。

IgM「キャプチャー」法の利点は、このクラスの免疫グロブリン抗体が一次免疫応答中に出現し、感染の活性段階を示す一方で、発症後には消失することです。一方、IgGクラスに属する抗ウイルス抗体は、発症後も長期間にわたり持続し、獲得免疫をもたらします。A型肝炎ウイルスの検出には、相補的vRNA DNAをプローブとして用いるDNAプローブ法が提案されています。

A型肝炎の治療

ウイルス性肝炎ではインターフェロンの生成が阻害されるため、A 型肝炎の治療はインターフェロンとその内因性合成の誘導剤であるアミキシンの使用に基づいています。

A型肝炎の特異的予防

これまで広く用いられていたガンマグロブリンを用いたA型肝炎の血清学的予防は効果が認められなかったため、ワクチン接種による予防が重視されるようになり、A型肝炎ワクチン接種が実施されています。この目的のために、様々な種類のワクチンが開発され、既に使用されています。ロシアでは、1995年に有効なA型肝炎ワクチンが開発され、現在も効果的に使用されています。