人工的に作成された白いラットの瘢痕への同種ケラチノサイトの移植に関する実験的研究

細胞の可能性を利用したいという願望と、瘢痕の審美的外観を改善するための新しい有効な方法を探求する必要性は、瘢痕表面へのケラチノサイト移植の可能性を研究しようとする考えにつながった。

傷跡実験的な作品の外観を高めるために、ケラチノサイトの文化を使用する可能性を証明するために瘢痕表面に作成された白い実験用ラット、上で行われています。瘢痕化モデルラットは、人為的に脊柱に沿って、背中に負わせた傷を癒すことにより調製しました。ラットを操作「瘢痕シミュレーションは、」皮膚剥離術（ignioperationの第一胃を経由して上位層の除去）と移植、同種ケラチノサイト、若いラットの皮膚から分離された2〜4日に行われた後、ラットを2.5ヶ月後。同じ革の部分、2×3センチの大きさにカットし、出産後に。

ラット表皮細胞の単離および増殖は、以下の技術の細胞学研究所RASの細胞技術の実験室で行われた。

皮膚を200U / mlのゲンタマイシンを含有するハンクス生理食塩水で洗浄し、面積0.2〜0.5cm ^2の小片に切断した。皮膚キューブを、平衡化生理食塩水緩衝溶液中の0.5％ディスパーゼ溶液中で37℃で1時間インキュベートした。次いで、この断片をダルベッコのリン酸緩衝食塩水に移し、表皮を真皮から分離した。表皮を0.125％トリプシン溶液中で10分間〜15分間、50rpmで攪拌しながらインキュベートした後、酵素の作用を5％ウシ胎仔血清の添加により停止させた。基板なしシャーレに-得られた細胞懸濁液の三分の一が、瘢痕を移植するためのオプションのいずれかのために純粋な形態で使用した第2、第3は、国内の生体適合性膜コーティング「Polipor」、第三の上に成長させました。得られた瘢痕をラットに貼り付け、続いてラット表皮細胞を移植する操作を、サーモカップルを用いてエーテル麻酔下で行った。

研磨で皮膚剥離後のラットの最初の群、生理食塩水で洗浄し、乾燥表面滅菌ルーメンが堆積した芝生の部分を重ね合わせたが（細胞学の研究所による）を1ml当たり150万個の細胞の濃度で、同種異系ラットepidermotsitovスラリーをスクランブル。細胞が傷跡の表面上に横たわるように、研磨された傷跡にバチストビー（Batistovye）片がはまる。いくつかの層のガーゼの包帯を上に縫い付け、これを傷の縁に縫い付けた。

得られた細胞懸濁液の一部を、ペトリ皿に、滅菌したポロポア（Polypore）フィルムで、カップの形状にカットし、他の部分をフィルムなしでペトリ皿上に置いた。培養は、DMEMとF12との3：1の混合物からなるFAD培地で行った。10％ウシ胎仔血清、5μg/ mlインスリン（Sigma）、0.5μg/ mlハイドロコルチゾンヘミサクシネート（Sigma）を添加した。10μg/ ml表皮成長因子EGF（Institute of Cytology RAS、St. Petersburg）。7人の個体を有する第2および第3群のラットを、最初の6日後に手術した。この時点までに、ラットに移植されたペトリ皿中の播種ケラチノサイトの懸濁液から多層の層が形成された。第2群には、基質のない多層層を有する第3群のフィルム上に表皮細胞を移植した。7日後、Polyporeフィルム上に播種したアロジェニックケラチノサイト（MPALK）の多層層を、創傷表面に直接培養により移植した。上では、フィルムは、そのリッピングを避けるために、多層のガーゼドレッシングで固定し、ラットの皮膚に縫い付けた。

ケラチノサイトを基板なしで成長させたラットの第三の群を、移植前に、選択的に真皮表皮通信を破壊する能力を有する、ペトリ皿ディスパーゼ処理の底部からのPACの分離を生成します。多層リザーバディスパーゼの作用下でペトリ皿の底へとはるかに少ない程度に基底細胞層の接続を破壊し、それが全体の層を「削除」することを可能にする間の通信に影響を与えます。配置による多層細胞層の剥離は、以下のように行った。輸送媒体をブレンドペトリ皿から、細胞シートは、特に、抗生物質を含む培地で3回洗浄した - ゲンタマイシン（0.2 mg / mlと）。多層層は、0125パーセントディスパーゼ溶液（«シグマ»）に注ぎ、それらは20〜30分間、T = 37℃でインキュベートしたインキュベーターに入れました。リザーバの周囲に剥離白花冠の外観、 - エッジとペトリ皿の底からそれを分離する工程の開始のインジケータ。分離プロセスの開始後の数分間は、ディスパーゼ溶液は、上皮層を培地で洗浄し、2〜3回空にしました。表皮層の表面に、塗布したドレッシングサイズカップピース滅菌創傷にカット「スパチュラでカップの底のさらなる層間剥離をディスパーゼ形成を分離切断されるリース色を、眼科用ピンセットを用いてナプキンのコーティングと共に層」「リース色（ロシア）離れたペトリ皿の底から壊れ、注意深く瘢痕の準備された表面に転写される。ナプキン「リタ色」は、その組成及びゲンタマイシンeksolin（コラーゲン抽出物）に含まれている、濡れた環境が将来芽残ります セムの生理食塩水を膨潤し、原因構造の初期湿潤に外部の感染と迅速な治癒から優れた保護を提供して近代的な傷の塗装となりました。

PolypropフィルムとLitaカラーナプキンは、より耐久性のある固定のためにラットの皮膚に縫い付けられたガーゼ包帯と重ねられた。各ラットを移植ケラチノサイトの維持および移植のための最適条件を作り出すために別個のケージに植え付けた。移植のための最も有利な条件の細胞を作成するために、滅菌生理食塩水で湿らせた包帯サスペンションとディスパーゼを撃っepidermotsitov多層容器を移植したラット、毎日、一日に数回、。フィルム "Polypor"が水不透過性であることを考慮すると、第2群のラットはドレッシングを湿らせず、これはフィルムのない移植に対する利点の1つであった。10日後、包帯を除去した。細胞移植後の瘢痕の臨床像は、移植を受けていない瘢痕とは少し異なっていたが、より多くのピンク色の着色（皮膚擦過による）およびより大きい剥離を除いて。この事実はそれを示唆している。IPCによる傷被覆の崩壊直後に、第1胃に変化は生じなかった。

ラットで生検材料を採取する。

ラットアロジェニックケラチノサイトを白いラットの基底瘢痕に移植した1,2,5および9ヶ月後、材料を組織学的、細胞形態学的および電子顕微鏡検査のために採取した。対照として、正常なラット皮膚および瘢痕のサンプルを細胞の移植なしで採取した。ラットの麻酔はエーテル麻酔で行った。

麻酔後、ケラチノサイトを移植した刻印された領域から、直径2mmの生検穿刺器を用いた。瘢痕組織片を採取し、2.5％グルタルアルデヒド溶液に入れて電子顕微鏡用材料を調製した。組織学的検査のために採取した組織片を中性ホルマリンの10％溶液に入れ、スピリッツを通しパラフィンに注ぎ、続いて超薄切片を切断し、それらを光学顕微鏡で観察した。

対照I.正常なラットの皮膚。

IPC移植後の特定の時点でのラットと瘢痕の正常な瘢痕改変皮膚の顕微鏡写真の違いを見るために、本研究のすべての段階で写真と説明を示す。

正常な皮膚の表皮は7-9層の細胞からなる。適度な厚さの角質層。場所では、それは角質の鱗の6-8層で構成されています。基底層は、大きな光、規則的な核およびいくつかの核小体を有する円筒形の細胞によって表される。細胞と基底膜との間のデスモソーム接続がはっきりと表される。細長い線維芽細胞、小血管を含むコラーゲンおよびエラスチン線維の束穏やかに表皮下の層の平行で、で微細突起を有する、明確に定義された基底膜下。より深い層では、コラーゲンとエラスチン繊維の束は異なる方向にある。その中には、同じ口径の細い壁、細胞要素（線維芽細胞、肥満細胞、白血球）を持つ多くの血管があります。多数の毛包、皮脂腺。

コントロール2ヶ月齢のラットの瘢痕。

臨床画像。傷跡が薄いピンク色で、剥がれ、地殻が残っています。彼らの面積は、コラーゲン線維の収縮に起因して減少し、約3.0〜3.5センチメートルになっています^：。皮膚の付着はない。

顕微鏡写真。表皮上層中の粒子を有する丸い基底細胞によって表さプリーツ細胞の3~5層、、、1本の行短剣、1-2行ケラトヒアリン顆粒から構成され、細胞内浮腫の部分があります。角膜層は、非常に薄いから厚くなるまで不均一に変化する。瘢痕組織の（収縮）による第一胃の折り畳みがある。折り目は、乳頭層に浸透し、乳頭の印象を与える。表皮と真皮との境界は直線である。基底膜はどこにでも追いつかない。表皮下層の下部には、厚くてゆるんだ壁があり、多くは荒れており、スタシス現象がある。血管周囲には、マクロファージ、線維芽細胞の集団があります。マクロファージは、毛細血管から出てくる赤血球を取り囲み、それらを貪食する。より表面的な層では - 小さな毛細管。表皮の下では、コラーゲン線維は緩んでいる。コラーゲン繊維の第一胃の粗い束のより深い層には、繊維芽細胞が多く存在する。

MPAlラットラットケラチノサイトの移植後1ヵ月後のラットの瘢痕。

臨床画像。傷跡はピンク色で、その面積は特に直径が減少し、平均2.5-3cm ^{2であった}。毛と皮脂腺は欠けている。

実質的に同一のせずにフィルム基板上に転写MPAlK MPAlKラットから得られた材料のこれらの顕微鏡検査。しかし、基板上にサポートされていないはるかに難しいと面倒成長MPAlKよりMPAlKと、技術的には、仕事なので、私たちは栽培のための基礎として使用移植kertainotsitovの傷跡上の問題のさらなる研究（「基質」）層状の芝生。

顕微鏡写真。ケラチノサイトは細く、細長く、垂直な形状とコンパクトな配置をほぼ15-20層に有する表皮の肥厚がある。基底細胞は不均一な線で配列されている。それらの核は、1つまたは2つの核小体を有する軽くて大きく、円形であり、その高い合成および増殖活性を示す。表皮と真皮との境界は直線である。棘の層はよく発達していて、丸い形の細胞の3〜5層から成り、2つの核小体がある。

基底膜の直下に、密度の高いコラーゲン線維の束の下に、多数の空の血管と並行して、より深いコラーゲン線維がより粗く、緻密な束に集められる。多くの大きな線維芽細胞、肥満細胞（視野の2〜3）、マクロファージ、白血球および空血管は、その周囲が緩んでおり、緩やかに位置するコラーゲン線維である。一部の船舶では、スタシス、均一な要素の欠如。血管周囲 - 線維芽細胞、単一のリンパ球。皮膚の付着はない。

ケラチノサイト懸濁液を研磨した傷跡に移植すると、顕微鏡写真は前のものとは異なる。ほとんどの動物では、表皮は薄く、細胞の5-6層からなる。下層は、不規則な形状の核を有する不規則な多角形の細胞からなる。表皮下層の状態は、移植をしていない動物の群の状態と同様である。

この場合、細胞移植に伴う過程の遅延、または懸濁液の形で移植された細胞の大きな損失のいずれかを話すことができる。従って、ケラチノサイト移植による瘢痕の矯正は、懸濁液の形で不適切であるという結論が出された。

MPAlラットラットケラチノサイトの移植2ヵ月後のラットの瘢痕。

臨床画像。傷は薄くて柔らかく見えます。場所には、脱毛、鱗があります。

顕微鏡写真。角質層が厚くなって、角質化が進行する。表皮は肥厚し、12〜20行の細胞からなる。表皮と真皮との境界は直線である。表皮下の繊細なコラーゲン線維はかなりしっかりと横たわっている。第一胃のより深い層では、それらは粗い大きな束で集められる。表皮下層では、新たな血管の形成が現れる。瘢痕組織の下層には、多くの空の血管があり、表皮の表面に平行に位置しています。大きな線維芽細胞は、第一胃の厚さに均一に分布し、巨大で、多面的で、多くのマクロファージが存在する。

ラット精子細胞のMPの移植後5ヶ月のラットの瘢痕。

臨床画像。瘢痕は、毛包のルーメン及び新生物におけるエッジ埋没毛包を示す瘢痕の周囲に、その高い密度の単一毛があり、剥離することなく、滑らかな、滑らかに見えます。瘢痕の面積は減少し続けている。

顕微鏡写真。上層の表皮は依然として厚く（15〜20層、場合によっては30まで）、ケラトゲアリン粒で満たされている。基底膜がはっきりと見える。彼女のコラーゲン繊維の下に緩んでいる。下層では、コラーゲンはより強力でしっかりと詰まっています。コラーゲンのビームの中には多くの毛細血管があります。上層には空の血管の数が減少しました。表皮と真皮はわずかに波状です。瘢痕組織には深い表皮成長があります。コラーゲン繊維の中には、新しく形成された血管が見える。単一の毛包および皮脂腺が現れる。

IPAラットラット表皮細胞の移植9ヵ月後のラットの瘢痕。

臨床画像。傷跡は以前の用語と比較してずっと小さくなり、その領域の平均は約1.5-2.0cm ^{2であった}。傷は薄い髪、特に周縁に不均一に覆われている。小さな小板のスケーリングは保持されます。

顕微鏡写真。

表皮は、6-8列の細胞からなり、ラットの正常皮膚の表皮構造を連想させ、細胞密度が1mmだけ薄くなった。より高く、より小さい。基底層は、丸い円筒形の小さなセルからなる。基底膜は明確に定義されており、ヘミデスモソームははっきりと見える。表皮下層の表皮成長の存在が注目される。乳頭層は、瘢痕の全長に沿って表される。これらの事実は、この期間において、移植されたケラチノサイトの接着が第一胃の下にある組織で有意に強くなったことを示す。その結果、IPC移植の9ヶ月後にMALC移植を受けた人々の瘢痕の治療は伝統的である可能性がある。表皮の下には、深層よりも繊細なコラーゲン繊維がある。特に表面的には多くの船があった。大きな容器では、壁が厚くなる。大量の毛包および皮脂腺。微視的なパターンは皮膚組織に似ている。

実験の結果とその議論。

基板無しキャンブリックと積層形成中の懸濁液として動作皮膚剥離後のラットの人工皮膚瘢痕、創傷表面上の様々なformah-における移植ケラチノサイト、上でこの作業中。この研究は、移植された同種異系ケラチノサイトが瘢痕に及ぼす影響に関する形態学的データを得るため、ならびに最適移植変種を決定するために行われた。

移植の3つの方法はすべて実用的であることが判明したが、基質なしでのIPAAの移植は、移植の結果に影響を及ぼすIPACが損傷を受ける可能性のある非常に面倒な手順である。さらに、移植のこの方法は、大きな表面での作業を排除する。

移植ケラチノサイト懸濁液 - 大幅より経済的な方法は、長い細胞を培養し、滅菌キャンブリックプリフォームを用いて、本実施形態における単純な接触を必要としない、の寸法は、瘢痕の値に対応しています。創傷被覆上のMICと比較して約1ヶ月間の細胞懸濁液の移植中の治療効果の遅れは、治療期間の重要な瞬間ではなく、数ヶ月で計算される。患者を熱傷するためのIPCの移植中に、皮膚構造状態の変換が徐々に数年間起こったことが知られている。創傷被覆材へのケラチノサイト培養物の移植は、最も便利で有望な方法であるが、それはさらに高価でもある。さらに、今日では、プラスチック、吸湿性でなければならず、静菌性または殺菌性を有し、細胞にとって生物学的に中性でなければならないより洗練されたコーティングを求めている。映画「Polipor」 - 国内のフィルム巻きカバレッジの中間バージョンは、いくつかの欠点にもかかわらず、私たちは傷跡の上に実験的にケラチノサイトの移植ラットを研究し、この方向の吸引瘢痕化の有効性についての結論を引き出すことができました。

焼けIPCの傷に移植を行った著者は、最初の週の間に消毒傷の多層貯留角化細胞の移植後、表皮は厚く成層と指摘しました。表皮のすべての層は明確に定義されていた。移植中の細胞層の数が皮膚生検標本におけるよりも10〜30％大きいことは興味深い。著者らは、3日目にすでにMPA、基底膜およびヘミデスモソームの移植後5日目に角化顆粒の顆粒の出現を指摘した。

J.Rivesら（L994）、Paramonov BA（1996）; NMクズネツォフら（1998）は、熱傷後polnosloynymi皮膚欠陥の移植BMD患者を以下の初期期間中、真皮と表皮との間の通信は非常に弱く、直線である、乳頭層が存在しないことを見出しました。2ヶ月目の終わりには浅い乳頭と皮膚付属、通信真皮と表皮の形成が強くなり始めます。文献データは、有望な方法として、焼けた患者の創傷上の同種ケラチノサイトの移植について述べている。同種異系のケラチノサイトの拒絶は、3ヶ月に10日間の期間中に様々な著者によって提出発生しているという事実にもかかわらず、しかし、彼らは成長因子を放出し、機械的に欠損を閉鎖、創傷面の治癒における役割を持っています。培養したとき、in vitroでは、それらが受信者の体内に長い時間のために存在することを可能にするランゲルハンス細胞を失うようMPAlKは、抗原活性が低下していると考えられています。また、健康な若い人たちの皮膚由来の同種の文化は、外傷後の患者の自家文化よりもはるかに大きい生物学的な可能性を秘めています。

我々の研究の主な目的は、同種異系ケラチノサイトが瘢痕上で生存するかどうか、およびそのような生物学的に活性な「創傷被覆」の影響下での瘢痕組織の変化が何であるかを調べることであった。肯定的な結果が得られた場合は、リハビリテーション医学の分野で最も効果的で労働集約的な技術を試してみてください。

多くの点で私たちによって得られたデータは、同種ケラチノサイトの傷口への移植後のヒト表皮で起こる形態学的変化に関する文献データと類似していることが判明した。しかし、移植された形態学的基質の面でも、技術面でも、大きな違いがあります。そう。基底膜および皮膚 - 表皮結合（ヘミデスモソーム、乳頭）の形成プロセスは、瘢痕の変化のない創傷表面へのケラチノサイト移植よりも後に起こる。これは、真皮または筋膜に比べて、第一胃組織の栄養不良が原因であると思われる。瘢痕、特に古いものは、非常に少数の血管を有する緻密な結合組織であり、熱傷の傷の底は、血管が豊富な顆粒組織である。したがって、ケラチノサイトの移植および生着が起こる条件は全く異なることは明らかである。細胞の移植領域が血管新生されるほど、それらを処理することがより容易になる。この仮定から、結合組織がまだ十分に緩んでおり、血管が豊富である若い傷跡を扱うことに対する好みについての結論がある。

この実験の結果、以下のことが証明された。

1. MALKの瘢痕への移植が可能です。 
2. 移植の最適な方法は、ケラチノサイトの創傷カバーへの移植である。
3. 瘢痕の表面は、シューマンのレーザーまたはカッターを用いて手術的な皮膚剥離を使用して粉砕しなければならない。
4. MPALKの影響下で、第一胃の地表面の急速な上皮化が起こる。
5. より良い血管新生瘢痕組織、すなわち、瘢痕が若いほど、ケラチノサイト移植の結果は良好である。
6. 移植されたケラチノサイトの影響下にある瘢痕組織は徐々に形質転換され、皮膚様（皮膚の付属器を有するより脆い瘢痕組織）に変わる。
7. 瘢痕組織の徐々の緩みは、表皮下層から始まる。血管形成を改善すると、第一胃の上部および下部のコラーゲン線維束は、細胞の移植がない瘢痕組織よりも脆弱な部位を取る。毛包と皮脂腺があります。肥大の段階を経た後のその構造の表皮は、正常な皮膚の表皮に近づいている。
8. 観察された変化は、瘢痕組織のトロフィズムは、瘢痕の改善につながる緩やかに硬い線維組織からその変換に寄与する改善成長因子分泌ケラチノサイト、サイトカインに関連しています。

従って、この研究に基づいて、種々のタイプの瘢痕を有する患者のリハビリに実際的に重要であり得る瘢痕組織への移植されたケラチノサイトの有益な効果が結論付けられ得る。

ラットでのこの作業はまた、必要条件を定めることを可能にした。ケラチノサイトが成長する創傷被覆材に適用される。

創傷被覆材は、

• 細胞と生体適合性があり、
• 通気性、
• 弾力のあるフォームビルディングのベースを持ち、
• 親水性であり、
• 医薬添加物は抗菌薬を含有し、抗酸化剤は培養細胞に有害ではないため、

瘢痕のバイオテクノロジー治療の臨床結果。

以前、N. Carver et al。（1993）は、閉塞性包帯はケラチノサイトの創傷および生存に付着するために最良であるが、層状（成熟した）表皮の形成を可能にしないことを見出した。層化した表皮を形成するためには、空気環境が必要である。したがって、多層層を付着させた後、7-10の後に閉鎖創カバーを示唆して、乾燥包帯または水溶性軟膏下で創傷を除去し、実施した。細胞が成長する「基質」の質と性質は、細胞材料の移植の有効性、ひいては医師の仕事の結果にとって非常に重要であると言える。しかし、提案されたオプション（人工皮革、カルボキシメチルセルロースの不織布、フィブリンコーティング、半透性ポリウレタンフィルム）が豊富であるにもかかわらず、今日は理想的な創傷被覆はない。この問題の重要な瞬間ではなく、高価なためにバイオテクノロジー処理の総費用が増加するため、「基材」（特殊創傷被覆材）のコストがあります。

細胞技術の有効性は今日まで証明されているが、残念なことに、これらの技術は、特に細胞組成物の工業生産が確立されていない国では、非常に高価である。それにもかかわらず、米国のような国々は、長年に渡り、火傷の移植のための細胞材料の生産のための産業を確立してきた。特に、会社BioSurfaceテクノロジー株式会社は、1989年以来、1センチメートルで、世界中の79カ国で240人の患者の治療のために使用されているケラチノサイトの37,000積層、（R.Odessey、1992）を上げ²細胞培養を約7-8コスト$ US。

さまざまな疾患や皮膚の問題を治療する技術にはいくつかの違いがありますが、細胞治療の中心には高品質の細胞材料の産生とその移植があります。

このプロセスは、次の手順で構成されます。

• 影響を受けた（またはドナーからの）皮膚の選択、
• バイオテクノロジーセンターへの皮膚フラップの輸送、
• 基底層の細胞の単離およびそれらの増殖、
• ケラチノサイト（IPC）の多層のビルドアップ。
• 細胞培養の移植。

多層ケラチノサイト層の移植による治療における主な問題は、細胞移植の全段階で生存細胞の必要性である。自己または同種細胞を単離するための皮膚片は、この場合、機械的方法および酵素的方法を使用して分離することがより容易であり、増殖のための生細胞の懸濁液を得ることができるため、できるだけ薄くすべきである。それらは、デルマトームを切断するか、まぶたの皮、包皮、肩の内面を使用して得ることができます。細胞はハロゲン（塩素、ヨウ素）、過酸化水素に敏感であるため、物質を摂取する際の皮膚の治療には使用できません。

皮膚移植片からの細胞の定量的および定性的収量およびそれらの栽培の有効性はまた、ドナーの健康状態および年齢に依存する。さらに、皮膚生検標本は、できるだけ早く、認定され認定された研究室に適切な条件（環境、温度）で検査室に届けられるべきである。

10％ウシ血清、5％ウシ胎仔血清および抗生物質を補充したDMEM培地を添加したイーグル培地または培地199を用いて、皮膚フラップを貯蔵および輸送することができる。

細胞学的研究室では、まず皮膚生検を機械的に小片に分割し、次にトリプシン、コラゲナーゼ、ジスパーゼなどの酵素を用いて皮膚断片のプロセシングを行う

酵素の作用の下、デスモソームによる破壊が起こり、ケラチノサイトは、異なる数の細胞からなる別々の細胞または凝集体として培地に放出される。培養のために、5％CO 2、ペトリ皿またはt = 37℃のバイアルを含むインキュベーター中で特殊培地上で培養される基礎ケラチノサイトのみが使用される。48時間以内にケラチノサイトコロニーの形成が観察され、徐々に単層に収束する。十分な数の細胞を得た後、得られた懸濁液をこの目的のために調製した創傷カバー上に広げ、ペトリ皿に入れる。懸濁液から、最初に単層、次いでケラチノサイトの多層層が形成される。概略的には、ケラチノサイト培養プロセスの段階を図1に示す。12（33.43.54.65）。

移植に適した多層ケラチノサイト形成の形成は、通常7〜10日かかる。時にはこの期間はより長く、原材料の質（年齢、ドナーの健康状態、材料の正確さ、使用されるメディアの品質など）によって異なります。多層層が増殖した場合、その表面には、移植に適さないアポトーシス現象を有する細胞が存在する可能性がある。ケラチノサイト（IPC）の多層層による創傷被覆材上に成長させたペトリ皿を、+ 15℃以上の温度で特別な容器でクリニックに送達する。

IPCを成長させるための改良されたグリーンの方法

創傷被覆としての私たちの研究では、我々はラットの実験で働き始めたポロポアのフィルムを放棄して、多層cambricを使用しました。従って、多層ケラチノサイト層は、最適な創傷被覆ではないが、前脂肪および無菌のバチステントで我々によって成長させた。

臨床研究は、必要な倫理的基準を遵守してボランティアに対して行われた。条約とインフォームド・コンセントに署名する。

1. 自分の（自己）培養物とバンク細胞（同種）ケラチノサイトから採取した培養物を適用した。
2. 自分のケラチノサイトは、患者の肩の内側から切り取った皮膚片から得た。
3. 傷の皮膚切除の手術は、熱電対、回転ディスクおよびエルビウムレーザーの助けを借りて行われた。
4. 正常栄養性、低栄養性および肥厚性の瘢痕を有する患者群が摂取された。

皮膚瘢痕のタイプを改善するための細胞技術の応用のための技術的プロセスは、以下の段階からなっていた：

1. 患者の選択。
2. 治療の本質、期待される結果を得る時期、条約の締結、インフォームドコンセントを説明してください。
3. 手術前の2〜3週間の患者の予約 1日に3回、1トンでジンケラル。1日3回。
4. 肩の内面から長さ2.0cm、幅0.7〜1.0cmの皮膚片を採取し、腋窩部のほぼ底部にあり、自己ケラチノサイトを得る。
5. 患者が、肩の内面に線状の傷跡を得る可能性があるために、自分のケラチノサイトを単離することを拒否した場合、細胞材料を細胞バンク（同種ケラチノサイト）から採取した。
6. ケラチノサイトを単離し、このタイプの研究のために認定された実験室の条件で増殖させた。
7. 移植に十分なIPCを受けた後、外科手術の日を診療所の傷跡に施し、材料をペトリ皿の特別な容器に入れた。
8. 皮膚剥離操作は、無菌IPCキャンブリックに移植その後止血接地面は、乾燥、滅菌生理食塩水で洗浄したルーメンを行う「ダウン細胞。」すなわち、MICで上部の細胞は、研磨された表面に隣接して、より低くなっていた。
9. 滅菌フィルムを上に重ね、これを弾性包帯またはOmnifix弾性バンドエイドで皮膚に固定した。フィルムの代わりに、シリコーンを含有する無関係の創傷コーティング、例えばMepitel、Mepiform、シリコーンゲルプレートも使用することができる。

5-7日後、フィルムまたはシリコーンコーティングを除去する。この時までに、全てのケラチノサイトは研磨された傷跡の上に這い回り、その表面に付着しなければならない。

10. フィルムとシリコーンコーティングの下に作られた濡れた環境は、これに積極的に貢献しています。この時点から傷跡に残っているバプテストは、キュウリまたはキトサンゲルを含浸させることができる。その結果、2日目には、患者の便宜のために、弾力性のある通気性の石膏、例えばオムニフィックス（Omnifix）で固定する方が高密度の地殻が形成される。通気性の外皮は、新しく形成された表皮が分化し、成熟した表皮に変わることを可能にする。

傷跡のタイプおよび研削の深さに応じて、8~10日後に包帯が拒絶される。この時点の表皮は、正常な皮膚よりも30〜40％多い細胞層を有する。基礎膜は形成されない。肥厚した表皮のケラチノサイトは、生物学的に活性な分子の塊を瘢痕組織に放出する。

生物学的な瘢痕治療の成功は、術後の治療法によって大きく左右されます。細胞培養物は「柔らかい」種類の創傷被覆であり、移植後の初期には、BMDは下層組織から容易に切り離すことができる。したがって、患者は手術後に瘢痕を治療するように勧められます。8〜9ヶ月間、冷たい沸騰した水でこすると簡単にこすらずに、薄くて新しく形成された表皮を剥がさないようにしてください。

注意：

手術前およびハロゲン化酸化剤、防腐剤（yodopiron、sulyodopiron、iodinol、yodinat、クロルヘキシジン、過酸化水素）の皮膚剥離使用時には、絶対に自分の細胞毒性作用に起因する禁忌kletok-移植前に許容されます。細胞毒性もメチレンブルーです。鮮やかな緑。

感染を避けるために、特に肥厚性瘢痕を用いて作業する場合、硫酸ネオマイシン、ポリミキシンまたはゲンタマイシンで手術野を治療することが可能である。それらはケラチノサイトに細胞毒性作用を及ぼさない。

この治療の結果、三重効果が達成される。

1. ルーメンの表面の整列。
2. 新しい表皮、通常の厚さの上にレイヤーを作成します。
3. それら、線維芽細胞およびマクロファージによって刺激移植細胞およびケラチノサイトによって分泌されるサイトカイン、成長因子および他の生物活性分子の作用によりdermopodobnuyuにおける瘢痕組織の変換。

瘢痕はあまり目立たなくなり、弾力性が増し、毛穴が出現し、髪がパフし、MPC中のメラノサイトの存在により色素沈着が回復する。

しかし、これらの肯定的な瞬間はすべて即座には出ません。この点で、患者に警告する必要があります。瘢痕組織の真皮への変換プロセスが遅く、そのような治療の最適結果が10-14ヶ月よりも早くなることは期待できない。ドレッシングが排除された直後に、研磨された表面は顕著な多色性を有し、研削加工がより明るくなる。エルビウムレーザーで正常瘢痕瘢痕を粉砕するときに、皮膚への損傷が最小限に抑えられます。瘢痕および周囲の皮膚の色は、3週間から8週間の期間に回復した。このような予防措置にもかかわらず、時には術後色素沈着があり、それは数ヶ月間独立して行うことができます。

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